尊龙凯时抗体检测ELISA操作流程精简版

尊龙凯时抗体检测通用ELISA操作流程（效价测定）

1）使用包被缓冲液配制1-10μg/ml的抗原溶液，需现配现用。

2）向高结合力ELISA板（货号80112）每孔加入100μl抗原溶液，覆以封板膜，在室温下轻摇孵育2-6小时，或选择在4℃过夜孵育。

3）吸弃溶液后，用洗涤缓冲液洗板2次，以确保板面的干净。

1）用封闭缓冲液母液配制工作液，每孔加入300μl，在室温下轻摇孵育2-6小时，或者选择在4℃过夜。

2）吸弃封闭液，并在吸水纸上拍干，板子可立即使用或密封保存于4℃备用。

1）用抗体稀释液对免疫前和免疫后血清进行梯度稀释（1:100至1:100,000），每孔加入100μl。覆盖封板膜，在室温下轻摇孵育30分钟。

2）吸弃液体，用洗涤缓冲液洗板5次（每次200-300μl，洗涤不充分可能导致高背景）。

3）用抗体稀释液配制HRP标记的抗兔二抗（1:5,000-1:20,000），每孔加入100μl。请注意，稀释不当可能会导致显色过弱或背景过高。

4）覆盖封板膜，在室温下轻摇孵育30分钟。

5）吸弃液体，并洗板5次后拍干。

6）每孔加入100μl现成的TMB底物溶液。

7）覆盖封板膜，在室温下轻摇孵育，直到阳性孔出现蓝色（最长时间15分钟）。

8）每孔加入100μl终止液，蓝色会转变为黄色。

9）在450nm波长下读取吸光度。

1）本ELISA流程适用于针对纯化抗原（蛋白质或多肽）产生的抗体的定性检测，不适用于对血清或其他体液中抗体浓度的定量测定。

2）本流程默认一抗来自兔源，若使用其他宿主动物需选用相应的二抗。

以下是尊龙凯时品牌下，AlphaDiagnostic提供的抗体检测试剂盒：

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